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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究_论文

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动物 医学进展 。 2 0 1 4 , 3 5 ( 2 ) : 1 - 5   Pr o g r e s s   i n  Ve t e r i na r y   Me d i c i ne   表 达 口蹄 疫病 毒 VP 1 — 2 A 基 因与 猪 I L 一 2重 组  腺 病 毒 的构 建 及 其 免 疫 效 果 研 究  苏春 霞  , 段相 国  , 郑  洁  , 林  源  , 郭  琳  , 陈 溥 言。   ( 1 . 宁 夏 医科 大学 基础 医 学 院病 原 生 物 学 与 免 疫 学 系 , 宁夏银川 7 5 0 0 0 4 ;   2 . 宁夏医科大学检验学院临床免疫学检验系 , 宁夏 银 川 7 5 0 0 0 4 ;   3 . 南 京 农 业 大 学 农 业 部 动 物 疫 病 诊 断与 免 疫 重 点 开放 实验 室 , 江苏南京 2 1 0 0 9 5 )   摘  要 : 构 建共表 达 口蹄 疫病 毒 ( F MDV)VP 1 — 2 A 基 因和猪 白细胞介 素 2 ( I L 一 2 ) 基 因的 重组 腺 病毒 , 并  研 究重组病 毒 对 小鼠特 异性 免疫 的影 响 。将 F MD V   VP 1 — 2 A 基 因和猪 I L - 2基 因先后 克 隆到腺 病毒 的穿梭  载体 p Ad e n o Va t o r — C MV5 一 I R E S — GF P 中, 在 受 体 茵 中与腺 病毒 骨 架 载 体 p Ad e n o Va t o r A E 1 / E 3同 源重 组 。   重组腺 病毒 质 粒转 染 HE K 一 2 9 3 A 细胞 , 得 到 重组 腺 病毒 r Ad 5 VP 1 - 2 A- P o   I L 一 2 。MT T法检测重组 I L 一 2的   生物活 性 。 用 r Ad 5 VP 1 — 2 A — p o I L 一 2免 疫接 种 小 鼠 , 同时设 免 疫 单 独表 达 F MD V  VP 1基 因的 重组 腺 病 毒  r Ad 5 VP 1和 空腺病 毒 的对照 组 。通过检 测淋 巴细 胞增 殖功 能 , 特 异性 抗 体分 泌 , I L 一 4和 I F N一 7的表 达 水 *  衡量 r Ad 5 VP 1 — 2 A— p o I L 一 2对 小 鼠特 异 性 免 疫 应 答 的 影 响 。 结 果 显 示 , 成 功 获得 了 r Ad 5 VP 1 — 2 A— p o I L 一 2 ,   MTT 法检 测 重组 I L 一 2具有 生物 学 活性 。小 鼠免 疫试 验 结 果显 示 , 与 r Ad 5 VP 1免 疫 组相 比 , r Ad 5 VP 1 - 2 A—   p o I L 一 2 免 疫 既能增 强重 组病毒 诱 导小 鼠淋 巴细胞 增殖 的能 力 , 又 能提 高重组 病毒 诱 导 小 鼠特异 性 抗体 的 水  * 。细胞 因 子 检 测 结 果 显 示 , 串联 I L 一 2能 促 进 重 组 病 毒 诱 导 T h 1和 Th 2的 分 化 。研 究 结 果 说 明 ,   r Ad 5 VP 1 — 2 A — p o I L 一 2可望成 为 口蹄 疫 的候 选 疫 苗。   关键 词 : 口蹄 疫病毒 ; 重组腺 病 毒 ; VP 1 - 2 A基 因; 白细 胞介素 2   中图 分 类 号 : ¥ 8 5 2 . 6 5 9 . 6   文献 标 识 码 : A   文章编号 : 1 0 0 7 — 5 0 3 8 ( 2 0 1 4 ) 0 2 — 0 0 0 1 — 0 5   口蹄 疫 ( F o o t - a n d — mo u t h   d i s e a s e , F MD)是 由   口蹄 疫病 毒 ( F o o t — a n d — mo u t h   d i s e a s e   v i r u s , F MD V)   免 疫应 答 。Z h a n g   C等 _ 8   将牛 I L 一 2与 口蹄 疫 病毒 的  VP 1 在 大肠 埃希 菌 中进行 了共 表 达 免 疫 豚 鼠 , 结 果  I L 一 2既 增 强 VP 1蛋 白诱 导 豚 鼠的体 液 免 疫 应答 又  增 强豚 鼠的细胞 免疫应 答 。本文 将 F MDV   V P 1 — 2 A   引起 的偶 蹄动物 的一 种传 染性 很强 的疾病 。该 病 的  流行 对畜 牧业 和 国际贸易 造 成 巨大 的危 害n ] 。在 流  行地 区控 制 口蹄 疫 主 要 通 过 使 用 灭 活 的 全 病 毒 疫  苗, 但灭 活疫 苗生 产 过 程 中存 在 散 毒 等 生 物 安 全 等  问题 , 因此 , 研 制更 为安 全 、 有 效 的新 型 疫 苗 是 当前  基 因 和猪 I L 一 2基 因通过 腺 病毒 载 体 进行 串联 表达 ,   旨在通 过 串联表 达 I L 一 2来 增 强 VP 1 蛋 白 的免 疫 效  果, 为研 制 F MD腺 病毒 载体疫 苗奠 定基 础 。   F MD疫 苗研 究 的 主要 策 略l _ 2   ] 。对 F MD V 抗 原 位  点的研究 表 明, 发 挥 主 要 作 用 的 是 VP 1蛋 白 , 但  VP 1 蛋 白上 线性表 位诱 导 的免疫应 答不 能有 效保 护  病毒 的攻 击 , 研 究者 试 图通 过各 种 细胞 因子佐 剂 , 刺  激 T 细胞 , 提 高细 胞免 疫应答 , 抵抗 强毒 的攻 击  ] 。   白细胞介 素 2 ( i n t e r l e u k i n - 2 , I L 一 2 ) 是 一 种 广 泛  使 用 的疫 苗佐 剂 。Qi n   Y等 _ 7 ] 通 过 内部


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